斑马鱼行为篇(102):斑马鱼前脉冲抑制实验

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惊跳反应(Startle Response)是一种快速的、反射性的肌肉收缩,通常由突然的声音或视觉刺激触发。这种反应在许多物种中都存在,包括人类和斑马鱼。惊跳反应的调节涉及复杂的神经通路,这些通路在某些神经疾病中可能受到影响,如精神分裂症。斑马鱼前脉冲抑制(PPI)实验是一种用于评估感觉运动门控功能的行为学测试,它在神经精神疾病研究中具有重要应用。斑马鱼模型因其幼虫的光学透明性和基因操作的便利性,被用于PPI实验以模拟神经发育障碍的关键内表型。在斑马鱼PPI实验中,通常使用听觉刺激模式,如爆破白噪音。实验包括适应期、强刺激实验以及弱刺激与强刺激不同时间间隔的一系列实验。这些实验顺序以随机方式给出,以确保后面的刺激作为新奇刺激出现,避免不应期对后续刺激的影响。
幼鱼通常以25-30组在6厘米的培养皿中进行研究,单个幼鱼在附着在培养皿上的10毫米直径的塑料O形环中进行测试。成鱼单独在直径10厘米的容器中进行研究,容器中有150毫升的鱼水。
使用三种类型的声学/振动刺激,为了研究PPI和对不同强度和频率刺激的惊吓反应,使用一个小型振动激励器控制,定时和波形由定制软件生成。峰峰加速度是通过以10,000帧/秒的速度测量刺激装置上固定粒子的位置来计算。使用由管状电磁铁传递的冲击“敲击”刺激。当使用敲击刺激时,前脉冲由一个振动换能器产生,该换能器安装在用于照亮幼鱼的灯箱上。传递一个2毫秒,500赫兹的振动。在所有实验中,惊吓诱导刺激以15秒的间隔传递。如果在同一实验中呈现不同的刺激,则使用随机完全区组设计。在PPI实验中,前脉冲试验与单独刺激试验以伪随机顺序交错进行。    
惊吓反应以两波发生:短潜伏期C型(SLC)反应和长潜伏期C型(LLC)反应。计算LLC反应性作为在第一波SLC反应启动后仍处于静止状态的所有鱼中,以长潜伏期C型弯曲反应的幼鱼数量的分数[LLC/剩余(LLC/R)]。在测试单个幼虫的PPI时,对敲击刺激表现出小于30%的惊吓反应的动物被归类为无反应者,类似于人类和动物的前脉冲抑制研究程序。对于PPI,百分抑制率计算为100×(对惊吓刺激反应的百分比 - 对前脉冲+惊吓序列反应的百分比)/(对惊吓刺激反应的百分比),类似于通常用于哺乳动物PPI研究的差异比例测量。    
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评估:
斑马鱼幼鱼对声刺激表现出惊吓反应,多粒子跟踪算法可用于分析斑马鱼幼虫的高速视频录像,能够定量描述单个鱼对刺激的反应的运动学。记录幼鱼可以每小时分析约2500个反应,包括惊吓反应的潜伏期、转角、角速度和持续时间等。    
参考文献:
  • Burgess HA, Granato M. Sensorimotor gating in larval zebrafish. J .Neurosci. 2007;27(18):4984–94. doi: 10.1523/JNEUROSCI.0615-07.2007.
  • Stewart AM, Kalueff AV. The developing utility of zebrafish models for cognitive enhancers research. Curr Neuropharmacol. 2012 Sep;10(3):263-71.    


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