动物行为实验指南丨动物社交攻击-逃避测试方法

脑声常谈

2024-11-29 10:07发布于上海科普领域创作者

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社交攻击-逃避测试（Social Attack-Escape Test）类似于居住者-入侵者测试，但更侧重于评估小鼠在社交互动中的逃避行为。
社交攻击逃避测试范式：
使用不熟悉的攻击性雄性CD1小鼠。在社会攻击逃避实验开始前30分钟，将雄性小鼠放置在一个内衬干净玉米芯垫料的实验箱（40 × 30 × 20厘米）中。使用一只攻击性雄性CD1小鼠作为“入侵者”。记录了连续两个明暗周期（总计20分钟）内由社会攻击诱导的逃避速度和移动距离。逃避速度被量化为小鼠在CD1小鼠接近并嗅探10秒内迅速逃离的速度，实验过程被记录和分析。每次小鼠测试后，垫料被更换，实验箱用75%的酒精擦拭，然后才引入新的一组小鼠。记录小鼠逃避攻击的速度和移动距离，以及逃避行为的潜伏期。
攻击行为的量化分析：
使用视频记录和行为分析软件来量化攻击行为，分析包括第一次攻击的潜伏期、总攻击次数和每次攻击的持续时间。
攻击行为的评分：
评分标准可能包括攻击行为的频率、强度、持续时间等。
长期攻击行为的观察：
在一些研究中，可能会观察小鼠在较长时间内的攻击行为，以评估攻击行为的稳定性和持续性。
实验程序：
社交挫败（Social Defeat, aSD）：
第一天：    
实验组：C57BL/6J小鼠被放入预先筛选过的CD1小鼠的笼子中，进行单一5分钟的社会挫败。对照组：非挫败对照小鼠未接受任何社交挫败，留在Homecage。
24小时后：
实验组和对照组：所有小鼠被放入一个新的测试场地中，测试场地中有一个装在金属杯中的CD1小鼠（与之前的CD1小鼠为同窝）。小鼠在测试场地中探索5分钟，然后返回自己的笼子。
后续测试：
一周后、四周后、十二周后（部分小鼠）：
小鼠再次被放入与第二天相同的测试场地中，测试场地中同样有一个装在金属杯中的CD1小鼠（与之前的CD1小鼠为同窝）。小鼠在测试场地中探索5分钟。
在24小时、一周和四周的时间点，CD1小鼠对实验小鼠来说是新奇的。在三个月的时间点，由于CD1小鼠的数量限制，实验小鼠被呈现一个早期时间点的CD1小鼠。
视频记录：在社交挫败和探究相遇过程中进行视频记录，以便进行行为分析。
评分行为：
  • 直接攻击时间：实验小鼠受到的直接攻击时间（秒）。
  • 被动顺从：在受到攻击时的冻结行为和逃离反应时间（秒）。
  • 防御性顺从：实验小鼠采取防御姿势（通常是直立姿势）并坚守阵地的时间（秒）。
  • 总顺从时间：将被动顺从和防御性顺从的时间相加，得到总的顺从时间。    
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视频分析：
测试场地划分：测试场地被分为两部分，距离装有CD1小鼠的金属杯最远的部分定义为“远区”，金属杯周围的16厘米直径区域定义为“交互区”。
  • 总移动距离（厘米）
  • 在远区的时间（秒）
  • 在交互区的时间（秒）
  • 进入交互区的次数
  • 回避小鼠定义：在300秒的测试时间内，在远区停留超过200秒的小鼠被定义为回避小鼠。
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小鼠在经历攻击性对抗（agonistic encounter）后的特定行为变化
1、在“远区”的时间：   
在经历攻击性对抗（aSD，acute social defeat）24小时后，被击败的小鼠在场地的“远区”（远离对手的区域）花费的时间显著多于未被击败的小鼠。
2、互动频率：
未被击败的对照组小鼠与CD1小鼠的互动频率显著高于被击败的小鼠，这个频率是通过计算小鼠进入互动区的独立次数来衡量的。
3、一个月后的回避行为：
在一次攻击性对抗后的一个月，两组小鼠整体上不再表现出显著不同的回避行为。这可能意味着随着时间的推移，被击败小鼠的行为逐渐恢复正常，或者两组小鼠的行为差异随时间减弱。
攻击性对抗可以导致小鼠出现持续的行为变化，包括增加回避行为和减少社交互动。这些变化可能与小鼠的恐惧和焦虑水平有关，也可能反映了小鼠对攻击性经历的长期记忆和适应。
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