轮状病毒是引起世界范围内5岁以下儿童严重脱水性腹泻的主要病因。全世界每年有超过1.4亿的5岁以下儿童患轮状病毒腹泻。轮状病毒腹泻目前无特效治疗药物，接种疫苗是预防该病的最有效手段。
口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗（以下简称三价轮状疫苗)用于预防轮状病毒血清型G1、G2、G3、G4和G9导致的婴幼儿腹泻。
《中华人民共和国药典》2020版(四部)“生物制品稳定性试验指导原则”已明确要求应对产品的运输条件进行相应的模拟试验。
疫苗运输稳定性研究是通过模拟疫苗运输过程中脱离冷链情况及流通环境，来考察疫苗原有的理化特性、纯度及效价等指标，以此评估该过程对疫苗质量稳定性的影响。
本研究以三价轮状疫苗为研究对象进行运输稳定性研究。经风险因素评估，选取兰州市至广西壮族自治区公路运输路线，进行一次往返运输，以此模拟运输过程中非温度因素的最差条件来考察运输过程对产品稳定性的影响;通过温度循环及极端温度等破坏性试验，来模拟疫苗脱离冷链条件后在极端条件下的情况，考察产品的温度偏移稳定性、有效性及安全性。
选取兰州市的冷库→冷藏车公路运输→广西壮族自治区的中转仓库暂存→冷藏车公路运输→兰州市的冷库为运输路线，采用无外包装的最低包装形式，由某公司验证合格的2～8℃冷藏车运输9批次三价轮状疫苗，每批次500支。沿途经过各分销站，模拟5次冷藏车开关门及搬运，进行一次疫苗冷藏车公路往返运输。疫苗运输结束后考察疫苗运输后特性变化、有效性和安全性。
往返运输结束后，9个批次的疫苗成品外观为粉红色澄清液体，符合质量标准;内包材均完整，破瓶率为0%;疫苗渗透压无明显变化，pH、装量、不溶性微粒、病毒滴度及热稳定性、异常毒性检查均合格。
运输前后疫苗各项指标，包括pH、渗透压、装量、微粒数、病毒滴度和热稳定性在疫苗运输前后差异均无统计学意义(P均＞0.05)，见下表。
将2～8℃储存的9批次疫苗，分别置于(37±2)℃、(－20±5)℃条件下放置7d。试验结束后逐瓶检查外观及内包材的完整性。对每批次抽样进行pH、渗透压、装量、重金属、不溶性微粒、病毒滴度检测，考察疫苗极端温度条件下的理化特性、有效性和安全性。
9批次疫苗分别在(37±2)℃、(－20±5)℃条件下放置7d后，内包材均完整，破损率为0%;外观、装量、不溶性微粒均符合质量标准。
（37±2)℃条件下放置7d后,病毒滴度平均下1.1lgCCID50/mL，与2～8℃及(－20±5)℃差异均有统计学意义(P均＜0.05)。
疫苗在(37±2)℃条件下放置3d可保证疫苗的安全性及有效性，但(37±2)℃条件下放置7d不能保证疫苗有效性；
极端低温(-20℃)放置7d对疫苗有效性无影响。
不同温度条件下的检测结果见下图。
将2～8℃储存的9批次疫苗，置于(－20±5)℃ 2d，然后再转移至(25±2)℃放置2d，1次温度循环试验结束，将以上样品再次置于(－20±5)℃ 2d，然后再转移至(25±2)℃放置2d进行第2次温度循环试验，重复以上操作，共进行3次温度循环试验。
9批次疫苗经过3次冻融后外观仍为粉红色澄清液体;内包材均完整，pH、渗透压、装量等无明显变化，均符合质量要求。
温度循环1次后疫苗的病毒滴度下降约0.2lgCCID50/mL，2次及3次循环后病毒滴度与1次循环无明显差别;
3次循环与0次温度循环的病毒滴度比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，病毒滴度合质量要求。
3次温度循环与0次循环的其他质量指标(如渗透压、不溶性微粒数、重金属)，检测结果两两比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)。各质量指标显著性差异分析，见下表。
三价轮状疫苗经过1次兰州市－广西壮族自治区－兰州市的长距离公路冷藏车运输，运输前后各质量指标差异无统计学意义，确认产品在运输过程中2～8℃保存条件下可以保持产品安全和有效性及包材的稳定性。
极端温度试验结果表明，三价轮状疫苗在(37±2)℃条件下放置3d可保证疫苗的安全性及有效性，但(37±2)℃条件下放置7d不能保证疫苗有效性，极端低温放置7d对疫苗有效性无影响，这也符合减毒活疫苗不耐受高温但对冻结不敏感的特性。
温度循环试验结果显示1次循环较0次循环病毒滴度下降0.2lgCCID50/mL，第2次及第3次循环较1次循环病毒滴度都不再下降，表明温度循环3次对病毒滴度的影响非常有限，不影响有效性，三价轮状疫苗在反复冻融3次后所有质量指标均符合质量标准。
本文对反复冻融超过3次以上的并未做研究。
参考文献：
[1]贺倩,窦强,邢家强,等.口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗(Vero细胞)运输稳定性研究[J].微生物学免疫学进展, 2022, 50(2):5-10.
供稿：陈军
来源：疫苗预防交流